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在細胞培養(yǎng)實驗中,流傳著一個詞語,叫做“談污色變”,污染對于每一位細胞培養(yǎng)者來說,都是災難,它讓我們的努力都付諸東流,所以,要想細胞正常生長,實驗圓滿完成,我們要先了解常見的細胞污染有哪些,并且針對這些污染要做出有效的防治措施。
一、細菌污染
細胞被細菌污染后,通常情況下,細胞培養(yǎng)液會變黃,變渾濁,鏡下觀察可見培養(yǎng)液中有大量圓球狀顆粒漂浮。常見的污染細菌為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌,這兩種細菌對青霉素和鏈霉素較為敏感,所以細胞輕度污染時,建議用雙抗(青鏈霉素)清洗處理,一般情況下,一周左右細胞可恢復正常;重度污染時,建議消殺后丟棄。
二、真菌污染
污染細胞的真菌多為煙曲霉、黑曲霉、孢子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌,培養(yǎng)液不會出現顏色變化,但時間長了以后會有菌絲或者菌團漂浮。顯微鏡下呈現樹枝狀或者串珠狀。細胞真菌污染后,較難根除,建議消殺后丟棄。
三、支原體污染
細胞被支原體污染后,細胞形態(tài)不會發(fā)生明顯變化,培養(yǎng)基也不會變渾濁,支原體可以和細胞共同生存,細胞不會死亡,但支原體會抑制細胞生長,影響細胞正常的代謝功能。需要特殊的檢測方法來判斷細胞是否被支原體污染,常用的方法有:DNA熒光染色法、支原體培養(yǎng)法、PCR法等。
四、黑膠蟲污染
黑膠蟲污染是近些年發(fā)現的一種細胞污染物,污染后在高倍鏡下可觀察到有“小黑點”在做布朗運動。對于它的分類,至今沒有明確的說法與證明。它與細胞存在競爭關系,細胞生長狀態(tài)好,數量多,黑膠蟲生長就會較少,但當黑膠蟲數量逐漸增多后,就會對細胞生長產生較大影響,甚至會引起細胞死亡。
五、防治措施
1、實驗環(huán)境
潔凈區(qū)在設計時,應將無菌工作區(qū)置于實驗室中相對僻靜的地方,應沒有過道,沒有產生灰塵、氣流等因素的干擾。
層流柜或生物安全柜潔凈級別應為A級,潔凈區(qū)應為B級,需定期進行沉降菌檢測及風速風量的檢測。
每周對實驗環(huán)境進行打掃及消毒:84消毒液和新潔爾滅交替使用清潔地面;紫外燈照射及臭氧熏蒸對潔凈區(qū)環(huán)境進行整體消毒。
2、無菌操作
操作者應具備較強的無菌意識,進入潔凈區(qū)前,清洗雙手,更換無菌服,戴好口罩及手套,頭發(fā)、手腕等要避免裸露在外,減少走動次數,操作時盡量避免互相交流。
實驗前,紫外燈照射潔凈區(qū)30min以上,實驗結束后,紫外燈照射潔凈區(qū)30min以上,保持實驗環(huán)境清潔。
操作時,若有溢出物,應及時用75%酒精擦拭,所有進入操作臺的物品,均應用75%酒精擦拭表面,進行消毒,避免物品攜帶污染物,造成培養(yǎng)物的污染。
3、儀器設備
每周或每月定期用75%酒精,對實驗室內儀器設備進行清潔消毒,特別是培養(yǎng)箱的儲水盤,可每周更換一次水,并且在水中添加抑菌劑。
4、試劑
未滅菌的試劑,均需高壓滅菌或過濾除菌后才能使用。
為了能夠安全的、正常的進行細胞培養(yǎng),如果遇到培養(yǎng)物被污染的問題,建議丟棄被污染的培養(yǎng)物,除非該細胞非常重要,可以嘗試去消除污染。