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一、細(xì)胞培養(yǎng)基發(fā)展歷史

細(xì)胞體外培養(yǎng)初期使用的培養(yǎng)基，都是天然培養(yǎng)基，也就是組織提取物或者體液，如血漿、血清、淋巴液、胚胎浸出液等，直到20世紀(jì)50年代Parke、Eagle等人，設(shè)計出化學(xué)成分明確的合成培養(yǎng)基：MEM培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基，這兩種培養(yǎng)基直到現(xiàn)在還被人們廣泛使用。在此基礎(chǔ)上，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)，在合成培養(yǎng)基中添加血清，可以使細(xì)胞維持更高的活細(xì)胞密度和更長的培養(yǎng)時間。隨著血清成分的不斷明確，科學(xué)家們逐步開始研發(fā)無血清培養(yǎng)基，減少血清對細(xì)胞培養(yǎng)的影響。

二、細(xì)胞培養(yǎng)基組成成分及功能

1、氨基酸

氨基酸是培養(yǎng)基中主要的氮源物質(zhì)，也是重要的能源物質(zhì)。

2、維生素

一般培養(yǎng)基中含有的維生素有：①脂溶性維生素：如A、D、E、K等；②水溶性維生素：如B、C、葉酸、煙酰胺等。培養(yǎng)基中添加維生素可以適合更多細(xì)胞系的生長。

3、無機(jī)鹽

無機(jī)鹽是維持培養(yǎng)基滲透壓平衡的主要物質(zhì)，它還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能，無機(jī)鹽主要包括：Ca2+、Mg2+、Cl-、Na+、K+等。

4、碳水化合物

細(xì)胞培養(yǎng)基中的碳水化合物通常被用作細(xì)胞的能量來源，常用的有葡萄糖、丙酮酸鈉等。

5、脂類

脂類物質(zhì)作為有機(jī)能量的來源，可以滿足細(xì)胞新陳代謝的需求，也可以支持細(xì)胞生長和存活，培養(yǎng)基中的脂類物質(zhì)主要有：膽固醇、乙醇胺、亞油酸等。

6、激素

激素類物質(zhì)主要包含：胰島素、生長激素、腎上腺素等，可以促進(jìn)細(xì)胞生長、提高細(xì)胞增殖能力，

7、微量元素

細(xì)胞培養(yǎng)基中微量元素主要有：銅、錳、鋅、硒等，這些微量元素對細(xì)胞無蛋白長期穩(wěn)定培養(yǎng)具有重要作用。

8、特殊添加物

蛋白水解物、酵母水解物等這些特殊添加物可以起到抗氧化劑、抗剪切劑、刺激抗體表達(dá)等作用。

9、緩沖體系

通常細(xì)胞培養(yǎng)基中會添加HEPES、磷酸鹽等緩沖物質(zhì)，可以調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH、滲透壓等。

三、培養(yǎng)基種類

1、BME細(xì)胞培養(yǎng)基：適用于各種傳代細(xì)胞系。

2、MEM細(xì)胞培養(yǎng)基：適合多種細(xì)胞單層生長。

3、DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基：根據(jù)葡萄糖含量可以分為低糖和高糖2種類型，低糖適用于培養(yǎng)貼壁依賴性細(xì)胞，高糖適用于高密度懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。

4、DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基：適用于原代細(xì)胞培養(yǎng)及難培養(yǎng)細(xì)胞。

5、M199細(xì)胞培養(yǎng)基：適用于培養(yǎng)多種種屬來源的細(xì)胞及能轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。

6、IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基：適用于高密度細(xì)胞的快速增殖培養(yǎng)。

7、RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基：適用于懸浮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等細(xì)胞培養(yǎng)。

8、HamF10細(xì)胞培養(yǎng)基：適用于克隆化培養(yǎng)。

9、McCoy5A細(xì)胞培養(yǎng)基：適用于原代細(xì)胞培養(yǎng)、淋巴細(xì)胞培養(yǎng)以及一些難培養(yǎng)的細(xì)胞。

10、L15細(xì)胞培養(yǎng)基：適用于快速增殖的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)。

四、培養(yǎng)基保存方法

1、液體培養(yǎng)基

液體培養(yǎng)基應(yīng)于2-8℃冰箱保存，實驗前放入37℃預(yù)熱。

2、干粉培養(yǎng)基

2-8℃冰箱避光保存。