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細胞培養(yǎng)最重要的就是保持無菌環(huán)境，實驗室無菌、培養(yǎng)液無菌、耗材無菌，為了給細胞創(chuàng)造良好的無菌環(huán)境，讓細胞生長的更加安心無憂，小編整理了細胞培養(yǎng)過程中消毒滅菌的方法，供大家參考。
1房間消毒
1.1紫外線消毒
紫外線消毒是一種物理消毒方法，輻照能量低，能殺滅直接照射到的微生物，包括細菌繁殖體、芽孢、分支桿菌、病毒、真菌、立克次體和支原體等，凡是被上述微生物污染的表面、水和空氣均可采用紫外線消毒。
紫外線消毒的原理主要是用紫外光摧毀微生物的遺傳物質核酸（DNA或RNA）使其不能分裂復制。除此之外，紫外線還可引起微生物其他結構的破壞。微生物不能復制繁殖，就會自然死亡，從而達到消毒的效果。
紫外線消毒的適宜溫度范圍是20~40℃，溫度過高或過低均會影響消毒效果，同時紫外線的消毒效果與紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關。輻射強度會隨距離增加而降低，照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈與被照射物的距離和照射時間要適合。離地面2米的30W紫外燈可照射9平方米房間，每天照射2~3小時，期間可間隔30分鐘。燈管離地面2米以外要延長照射時間，2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作臺的距離不應超過1.5米，照射時間30分鐘為宜。
紫外線對微生物有強大的殺傷力，對人體同樣有一定的傷害作用，人體最易受傷的部位是眼睛，因此在任何時候都不可以直視亮著的紫外燈管。紫外燈也會對皮膚造成傷害，并且對培養(yǎng)細胞與試劑等也會產生不良影響，因此不要在紫外線燈照射下進行操作。
1.2臭氧熏蒸
臭氧滅菌為溶菌級方法，殺菌徹底，無殘留，殺菌廣譜，可殺滅細菌繁殖體和芽孢、病毒、真菌等，并可破壞肉毒桿菌毒素。另外，臭氧對霉菌都有殺滅作用。
臭氧由于穩(wěn)定性差，很快會自行分解為氧氣或單個氧原子，而單個氧原子能自行結合成氧分子，不存在任何有毒殘留物，所以，臭氧是一種無污染的消毒劑。
臭氧為氣體，能迅速彌漫到整個滅菌空間，滅菌無死角。而傳統(tǒng)的滅菌消毒方法，無論是紫外線，還是化學熏蒸法，都有不徹底、有死角、工作量大、有殘留污染或有異味等缺點，并有可能損害人體健康。如用紫外線消毒，在光線照射不到的地方沒有效果，有衰退、穿透力弱、使用壽命不長等缺點?；瘜W熏蒸法也存在不足之處，如對抗藥性很強的細菌和病毒，則殺菌效果不明顯。
1.3酒精、新潔爾滅消毒
實驗室常用75%酒精對操作者皮膚、操作臺表面以及實驗室墻壁進行消毒，75%酒精的消毒原理是能夠導致細胞脫水，同時致使蛋白質變性。
0.1%新潔爾滅對于微生物細胞膜有破壞作用，通過影響其通透性而起到消毒作用。新潔爾滅對革蘭氏陽性菌的作用強，對革蘭氏陰性菌也有作用，但對抗酸桿菌如結核菌桿、芽飽菌、霉菌等作用很微弱。
2設備消毒
細胞培養(yǎng)箱作為實驗室常用設備，在使用過程中需要定期進行消毒，常用的消毒方法有：
（1）先用純水擦拭，再用95%酒精擦拭內壁，紫外線照射即可；
（2）直接用75%酒精擦拭內壁，通風10分鐘，紫外線照射30分鐘；
（3）如果沒有紫外線照射，一般用70%的酒精擦洗，然后再用0.1%的新潔爾滅擦洗，可再用高錳酸鉀和甲醛1:1比例熏一遍，注意要是熏的話千萬注意混合之后馬上離開，因為味道具有刺激性；
（4）先用75%的酒精擦拭內壁，然后用甲醛、高錳酸鉀熏蒸一個晚上，然后通風一整天（同時打開紫外線照射）；
（5）把培養(yǎng)箱里的板層拿出來高壓一下，箱壁用75％酒精擦一遍，再用紫外線照一夜。
3物品、試劑消毒滅菌
3.1 干熱滅菌
干熱滅菌法是在干燥環(huán)境下用高溫殺死細菌和細菌芽孢的技術。主要用于滅菌玻璃制品、金屬制品、抗熱的塑料制品以及不能接觸蒸汽的物品。滅菌時溫度需保持在160℃，并且持續(xù)90~120分鐘，
干熱滅菌完成后不可立即打開，須等物品逐漸冷卻后再打開，防止物品因為溫度驟變，出現破裂。
3.2 濕熱滅菌
濕熱滅菌是利用熱蒸汽滅菌，熱蒸汽穿透力強，使細胞蛋白質變性，能有效地殺滅微生物?？蓱糜跓岱€(wěn)定的液體（水、鹽溶液、特殊配方的培養(yǎng)基）、玻璃器皿、金屬器皿等，通常需要在121℃條件下放置30min。濕熱滅菌完成后的物品是潮濕的，需要及時將物品放在烘箱或干燥架中，干燥完成后，再儲存?zhèn)溆?，否則，潮濕的物品表面容易滋生微生物，造成污染。
3.3 過濾除菌
不耐熱的液體可以采用微孔過濾器除菌，利用微孔濾膜將大于孔徑的細菌等微生物截留，從而達到除菌目的。
常用方法一般有正壓過濾法和負壓過濾法，正壓過濾法是使用可用針式濾器、連線式多碟濾器以及筒狀濾器等進行過濾除菌；負壓過濾法是將真空瓶與濾器相連，再利用真空管或真空泵進行過濾除菌。目前，大多實驗室常采用微孔濾膜進行過濾除菌。